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沙门氏菌检验方法及注意事项

作者:   发布时间:2020-05-18 16:06:11   浏览量:
1.1 沙门氏菌检验方法
按照 GB 4789.4-2010,沙门氏菌检验有 5 个基本步骤:前增菌 (BPW 增菌液,36 ℃土 1 ℃,8 h-18 h); 选择性增菌 (TIB,42 ℃土 1℃, 18 h-24 h 和 SC,36 ℃土 1℃, 18 h-24 h) ;选择性平板分离 (BS,36℃土 1℃,40 h-48 h; XLD 或 HE 或沙门氏菌显色培养基,36℃土 1℃, 18 h-24 h) ;生化试验,鉴定到属;血清凝集试验。
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1.2 前增菌、选择性增菌试验注意事项
a) 前增菌所使用的 BPW 增菌液是使处于濒死状态的沙门氏菌恢复活力,没有添加任何的抑菌剂,增菌时间为 8 h-18 h,增菌时间不易过长,否 则杂菌也会相应增多。
b) 选择性增菌液 SC 中亚晒酸盐与某些硫化物形成晒硫化合物可起到抑菌作用,脱氨酸可促进沙门氏菌生长,*适增菌温度为 36℃,时间为 18 h-24h,比较适合伤寒沙门氏菌和甲型副伤寒沙门氏菌的增菌;啊’B中的主要抑菌剂为四硫磺酸销和磺绿,*适增菌温度为 42℃,时间为 18 h-24 h,比较适合其他沙门氏菌的增菌。所以需要同时使用SC 与TTB,可提高检出率,以防漏检。
1.3 分离培养试验注意事项
a) 不同培养基选择性强弱不同,一种培养基不可能适合的沙门氏菌,所以要同时使用两种以上的培养基,须用一个BS,同时再用一个XLD 或 HE 或显色培养基,形成互补,提高检出率,以防漏检。
b) BS 较其他培养基抑菌作用强,沙门氏菌生长亦被减缓,所以要适当延长培养时间,培养40h-48 h。
c) XLD、HE 培养基应前一天配制,次日使用,配制时勿需高压灭菌,不易过分加热,并于室温、干燥、阴暗处保存,且不要快 过 48 h 使用,保存时间过长,会降低其选择性。
d) 沙门氏菌主要来源于粪便,而粪便中埃希氏菌属占有优势,所以在选择性培养基中需加入乳糖指示系统和硫化氢指示系统。
e) 观察菌落特征,应观察平板上独立区域的单个菌落,而不要观察片状区域的菌落或卫星菌落。
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1.4 生化试验与血清学试验申的注意事项
a)分离纯化可疑菌落,这一步至关重要,需要多次纯化,如若菌落不纯,会直接影响生化试验的结果,尤其像山梨醇、甘露醇这类观察接种前后颜色变化的项目。
b) TSI易制成高层斜面,采用 18 mmX 180 mm 试管,高层斜面琼脂分装彭句为试管容量的三分之一, 且斜面与底层柱高的比例约为 1 : 2,如果底层柱高部分过少,则会影响穿剌后底层现象的观察效果。
c) 作肯定基质试验用到的蛋白陈水中应含有丰富的色氨酸,因此每批蛋白陈买来后,应先用已知菌种鉴定后方可使用。
d) 由于选择性培养基含有抑菌剂,所以生长出的菌苔生化特性不是很好,会影响山梨醇、甘露醇接种前后颜色变化的判断,快 易出现似黄非黄,似绿非绿这样模棱两可的结果。所以应尽量选择营养琼脂平板上的新鲜菌苔,如为营养琼脂斜面,则选用斜面中段的菌苔,进行生化试验及血清学试验。
e) 血清学鉴定,做玻片凝集试验时,需检查培养物有无自凝性,即生理盐水对照。
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